چگونگی استفاده از روش SSCP-PCR براي بررسی چند شکلی ژن لپتین گوسفند کرمانی

شناسایی ژنهاي موثر بر تعادل انرژي، تولید شیر و مصرف خوراك از علاقهمنديهاي اخیر پژوهشگران اصلاح نژاداست. در ایران علی رغم وجود منابع غنی حیوانی، تلاشهاي اندکی براي شناسایی ژنهاي کنترل کنندهي صفات درآنها صورت گرفته است. بنابراین، شناسایی ژنهاي کاندیداي موثر بر صفات اقتصادي میتواند به اصلاح نژاد گوسفنددر کشور کمک شایانی نماید. در این تحقیق براي بررسی چند شکلی ژن لپتین از 120 رأس گوسفند نر و مادهي کرمانیایستگاه اصلاح نژاد شهر بابک خونگیري شد. پس از استخراج DNA با استفاده از کیت استخراج استاندارد، واکنشزنجیرهاي پلیمراز براي تکثیر قطعهي 275 جفت بازي از اگزون سوم این ژن انجام شد. پس از تعیین چند شکلی فضاییتکرشتهاي، محصولات PCR ،الگوهاي باندي مربوط به ژن لپتین با استفاده از ژل آکریل آمید و رنگ آمیزي نیترات،A/B/F ،A/B/E ،A/B/C ،A/C ،A/B ،C/C ،A/A الگوي 10 ،مطالعه مورد نمونهي در لپتین ژن براي. آمد بدست، نقرهF/C/A ،E/D/B/A وF/C/B/A بدست آمد که نشان دهندهي چندشکلی بالاي در ژن لپتین گوسفندان نژاد کرمانی می-باشد.

Identification of associated genes with energy balance, yield and feed intake are recent interests of the animal breeding researchers. With consider to rich resources of animals, in our country-Iran, accomplish a little assay for identification of genes that controlling its traits with molecular techniques. Identify the candidate genes in sheep breeds using DNA test can have a great help for their breeding progress. In this research, for analysis of leptin gene polymorphism in Kermani sheep, we collected blood samples of one hundred and twenty male and female Kermani sheeps which were rearing in breeding center of Shahre Babak, Kerman. Genomic DNA was extracted using commercial DNA extraction Kit. The exon 3 (275 bp segment of exon 3) of leptin gene was amplified with specific primers. The single stranded conformation polymorphism (SSCP) patterns of PCR product were studied using Acrilamid gel and silver staining method. We obtained 10 band patterns for leptin gene: A/A, C/C, A/B, A/C, A/B/C, A/B/E, A/B/F, A/C/F, A/B/D/E and A/B/C/F. The results showed that leptin gene is so polymorphic in studied population.